丙肝疫苗的研究现状:核酸疫苗

丙肝疫苗的研究现状:核酸疫苗

　　核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA ) 直接导入动物体细胞内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。由于HCV结构的变异，与传统蛋白质疫苗相比，DNA疫苗明显优于传统疫苗。DNA疫苗克服了传统病毒减毒疫苗、灭活疫苗或多肽疫苗所造成的抗原决定簇的改变，保持了完整的免疫原性；DNA疫苗既可诱导体液免疫又可诱导细胞免疫，而以后者为主要特征；DNA疫苗可在体内长期、稳定表达外源蛋白，这为研制和开发利用多基因型与基因突变率高的病毒性疾病疫苗提供了理论依据。主要有C区DNA疫苗、E区DNA疫苗、C+E区DNA疫苗、Ns区DNA疫苗等。 　　Zhu等研究了以HCV E1、E2基困构建的重组质粒免疫BALB／c小鼠的免疫效果。结果表明：3次免疫后，所有小鼠均出现了抗El、E2抗体，抗E1抗体滴度最高达l：320，而抗F2抗体滴度最高达1：1280。淋巴细胞增殖实验未见有针对E1的特异性增殖，而针对E2的增殖刺激指数平均为1.4，且免疫后的小鼠IFN-1的分泌也显著高于对照组。Lagging等构建了C基因（第1-191aa）重组质粒pcDNA HCV Core，0.2 mg质粒肌肉注射免疫BALB／c小鼠2-3次后，于第6 wk处死小鼠，可检测到较高水平的抗C抗体，免疫2次或3次的抗体滴度相似。这些结果提示HCV C区将有助于HCV疫苗的研制。以上实验说明，HCV C区构建的重组质粒均能在真核细胞中表达，且能诱导出特异性体液免疫和细胞免疫，加上C区相对保守，是研制HCV DNA疫苗的主要靶抗原之一。Rollier等以HCV Ia基因型E2区不同基因片段构建了3种不同重组体，用im或im加iE等不同途径免疫小鼠，抗体阳性率在60-100％之间。可见HCV DNA免疫，im加iE是最有效的方法。Ara等[9]将编码结构区（C+E1+E2）基因片段（341-2449nt）克隆入含CMV启动子的PRC载体中，构建HCV结构区DNA疫苗，通过哺乳细胞体外表达和免疫小鼠研究证实，其不仅能在Human293、BALB／c、cosl中表达C、E1、E2蛋白，而且还能诱导BALB／c小鼠产生抗体和特异性CTL的活性。另有人用HCV C+E2序列构建的质粒DNA疫苗免疫小鼠能诱导特异性的CTL活性、抗C和抗E2抗体应答，和Thl为主的增生有关。Lang等 [10]一证实在HCV NS3区存在一个CTL表位，其最小单位由10肽组成，推测其可作为HCV DNA疫苗构建的有效。
　　与传统的蛋白质疫苗相比，DNA疫苗有可激发机体全面的免疫应答、可表达接近天然构象的抗原，抗原性强以及能联合免疫等优点。但同时，DNA疫苗仍有许多实际问题阻碍其发展。主要体现在：（1）HCV属RNA病毒，具有高度的变异性；（2）只对人及黑猩猩易感；（3）难以体外培养；（4）缺乏有效的体外复制系统等问题，仍需进一步研究。